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基因突变实验去哪里做?华谨可做各类基因突变试验，独立的生物学检测中心，包括各细胞基因突变试验等，出具第三方基因突变实验检测报告。

检测范围
体外哺乳类细胞基因突变实验，化妆品基因突变实验，小鼠淋巴瘤基因突变实验，酵母菌基因突变实验，

基因突变实验

野生型质粒构建
1.引物设计：根据需要验证的基因序列，设计需要扩增的基因片段引物。

2. 线性化质粒：将原始的质粒载体，比如 pcDNA3.1 质粒，选择合适的酶切位点，比如 NheI/KpnI 进行酶切，获得线性化的质粒。

3. 质粒连接：将线性化的载体与目的基因的连接，推荐在 10~20μl 反应体系中进行连接反应，可以选择 T4 酶进行黏性末端的连接。

4. 转化涂板：将连接产物转化到受体菌中(一般为 DH5a)，涂板，培养过夜。次日，挑取平板上单克隆菌落进行摇菌, 送菌液测序，得到野生型质粒。

突变型质粒构建
在得到野生型质粒之后，下一步就是对目的基因片段进行突变啦，即将目的基因上面的一个碱基或多个碱基换成另外的碱基。

1.突变引物设计: 向质粒进行单点或者多点突变，只需要设计一对引物，进行 PCR 的扩增，替换掉野生型基因的突变位点碱基。

2.突变质粒的扩增：突变质粒的扩增过程中，需要选用高保真酶 Pfu 酶进行质粒扩增, 防止引进新的突变。通过 PCR 过程，突变型质粒也得到了扩增。

3. 得到 PCR 产物后，将产物立即置于冰上，然后在 PCR 反应体系中加入 1 微升 Dpn I，混匀后 37℃孵育 1-2 小时。DpnI 能够识别甲基化位点并将其酶切。从大肠杆菌里提取原始质粒模板一般都被甲基化的，DpnI 可以将原始野生型质粒模板进行酶切, 而质粒扩增的突变型质粒不能被酶切从而保留下来。

4. 最后，将酶切后产物转化入大肠杆菌，通过涂板挑取单克隆菌落后，摇菌测序，这样就可以得到突变基因的质粒啦。

检测标准
《化学品:体外哺乳动物细胞基因突变试验方法(GB/T 21793-2008)》

作者：华谨检测罗工 18688243060